NGHIÊN CỨU CHUYỂN GEN EcHB1 LÀM TĂNG CHIỀU DÀI SỢI GỖ CHO DÒNG BẠCH ĐÀN LAI UP THÔNG QUA Agrobacterium tumefaciens
Từ khóa:
Bạch đàn lai UP, chuyển gen, chiều dài sợi gỗ, gen EcHB1Tóm tắt
Gen EcHB1 là gen giúp tăng chiều dài sợi gỗ cho bạch đàn đã được phân lập từ bạch đàn grandis (E. grandis). Trong nghiên cứu này, chúng tôi tiến hành chuyển gen EcHB1 vào bạch đàn lai UP (E. urophylla × E. pellita) thông qua vi khuẩn A. tumefaciens. Kết quả nghiên cứu đã xác định ngưỡng nồng độ chất chọn lọc kanamycin tới khả năng sống của mẫu là 150 mg/l và tới khả năng ra rễ của chồi là 50 mg/l. Sử dụng dịch khuẩn A. tumefaciens nồng độ OD600 = 0,5 để biến nạp gen EcHB1 trong dung dịch huyền phù có bổ sung 100 µM Acetosyringone vào bạch đàn lai UP với thời gian biến nạp 10 phút. Sau 72 giờ đồng nuôi cấy, các đoạn thân và lá đã biến nạp gen được tái sinh trên môi trường chọn lọc MS* bổ sung 0,5 mg/l BAP, 0,2 mg/l NAA, 400 mg/l Cefotaxim và 150 mg/l Kanamycin. Sau ba lần chọn lọc trên môi trường tái sinh, các chồi bạch đàn lai UP chuyển gen được cấy trên môi trường ra rễ chọn lọc có bổ sung 50g/l Kanamycin. Kết quả phân tích cây chuyển gen giai đoạn
vườn ươm bằng phương pháp PCR đã khẳng định sự có mặt của gen EcHB1 trong cây bạch đàn lai UP
Tài liệu tham khảo
1. Bandyopadhyay S., Cane K., Rasmussen G., Hamill J.D., 1999. Efficient plant regeneration from seedling explants of two commercially important temperate Eucalyptus species - Eucalyptus nitens and E. globulus. Plant Sci 140 (2):189 - 198.
2. Cid L.P.B., Machado A.C.M.G., Carvalheira S.B.R.C., Brasileiro A.C.M, 1999. Plant regeneration from seedling explants of E. grandis × E. urophylla. Plant Cell, Tissue and Organ Culture 56: 17 - 23.
3. Cheng, 2006. Eucalyptus urophylla transformation and selection. Patent: US20060101537 A1.
4. Dibax R., Eisfeld C.L., Cuquel F.L., Koehler H., Quoirin M., 2005. Plant regeneration from cotyledonnary explants of Eucalyptus cammaldulensis. Science Agriculture (Piracicaba, Braz.) 62: 406 - 412.
5. Dibax R., Deschamps C., Bespalhok Filho J.C., Vieira E., Molinari C., Campos D., Quoirin M., 2010. Organogenesis and Agrobacterium tumefaciens mediated transformation of Eucalyptus saligna with P5CS gene. Biol Plant 54(1): 6 - 12.
6. Doyle, J.J., Doyle,J.J., 1990. Isolation of plant DNA from fresh tissue. Focus,. 12: p. 13 - 15.
7. Ho C.K., Chang S.H., Tsay J.Y., Tsai C.J., Chiang V.L., Chen Z.Z., 1998. Agrobacterium tumefaciens - mediated transformation of Eucalyptus camaldulensis and production of transgenic plants. Plant Cell Rep 17: 675 - 680.
8. Huang Z.C., Zeng F.H., Lu X.Y., 2010. Efficient regeneration of Eucalyptus urophylla from seedling - derived hypocotyls. Biologia Plantarum 54 (1): 131 - 134.
9. Prakash M.G. and Gurumurthi K., 2005. Somatic embryogenesis and plant regeneration in Eucalyptus tereticornis Sm. Current Science 88: 1311 - 1316.
10. Tournier V., Grat S., Marque C., Kayal W., Penchel R., Andrade D.G., Boudet A.M., Teulieres C., 2003. An efficient procedure to stably introduce genes into an economically important pulp tree (Eucalyptus grandis × Eucalyptus urophylla). Trans Res 12: 403 - 411.
